Оксид азота
Оксид азота (NO)
Является важнейшим регулятором гомеостаза. Синтез NO постоянно образуется и выделяется из эндотелия. Оксид азота образуется из аминокислоты L-аргинина при участии NO-синтаз (NOS). Активность эндотелиальной NOS наиболее выражена в эндотелии артериальных сосудов и минимальна в эндотелии капилляров и венозных сосудов. Период полураспада для оксида азота исчисляется несколькими секундами в условиях in vitro и составляет доли секунды in vivo. Многие клетки осуществляют свою функцию через продукцию NO. Например, макрофаги в некоторых состояниях ингибируют пролиферацию лимфоцитов NO-зависимым механизмом. NO характеризуют как сильный медиатор натуральных супрессорных клеток в костном мозге. Установлено, что интерферон-γ является индуктором NO-синтеза. NO оказывает разнообразные гомеостатические воздействия как активатор растворимой гуанилатциклазы, стимулятор нейронов, нейротрансмиттер периферической нервной системой и регулятор сокращения гладкой мускулатуры и сосудистого эндотелия. Кроме того, NO участвует в формировании обонятельной памяти, синаптических связей и их ремоделировании. Одним из главных условий ангиогенеза является повышение проницаемости эндотелия. Что связывают преимущественно с действием оксида азота. Повышение проницаемости сосудов необходимо для выхода белков плазмы крови, и в первую очередь – фибриногена, что приводит к образованию фибриновой основы для последующей миграции эндотелиоцитов. NO отвечает за вазодилататорный эффект релаксирующего фактора, выделяемого эндотелием. В ответ на повреждение эндотелий сосудов вырабатывает семейство аминопептидов, называемых эндотелинами. Полагают, что вазодилататорное действие NO направлено против вазоконстрикторного эффекта эндотелинов.
Нестабильность NO делает непригодным стандартные методы его определения. Так как большая часть NO окисляется в нитрит (NO2-) и нитрат (NO3-), спектрофотометрически измеряют NO2-, используя реакцию Грисса.
Тест-система для определения NO, поставляемая компанией БиоХимМак, (R&D Systems, Total Nitric Oxide Assay) основана на принципе превращения нитрата в нитрит в реакции, катализируемой ферментом нитрат-редуктазой. Общий нитрит определяется затем по абсорбции азо-красителя в реакции Грисса при длине волны 540 нм.