 |
 |
|
|
||
 |
||
|
||
 |
||
|
||
 |
||
|
||
 |
||
|
||
 |
||
|
||
 |
||
|
||
 |
||
|
||
 |
||
|
||
 |
||
|
||
 |
||
|
||
 |
||
 |
||
 |
||
|
||
 |
||
|
||
 |
Организация микологической лаборатории
1.1. Устройство и противоэпидемический режим
Согласно инструкции СП 1.2.036-95 Госкомэпиднадзора РФ, Москва, 1996 г. "Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности” по эпидемиологической опасности дрожжевые и плесневые грибы, а также дерматофиты относятся к III-IV группам возбудителей инфекционных болезней, а грибы-возбудители гистоплазмоза, бластомикоза и кокцидиоидоза - ко II группе патогенности. Поэтому при работе с ними необходимо соблюдать особые правила техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены, направленные на обеспечение личной и общественной профилактики заражения, аллергизации и распространения инфекции. Работа с культурами грибов II группы может производиться только на основании разрешения, выданного санэпидстанцией, с соблюдением инструкций по технике безопасности.
Лаборатория для работы с микроорганизмами III-IV групп должна иметь определенный набор помещений, включая комнату (или специально оборудованное место) для приема и регистрации материала, бокс-посевную для посева и работы с культурами, комнату для варки сред, комнату с автоклавами для стерилизации и уничтожения патологического материала и культур, моечную, препараторскую, кладовую, гардероб для одежды сотрудников, туалет. Лаборатория укомплектовывается легко дезинфицирующейся мебелью, включая шкафы для чистой лабораторной посуды, реактивов, питательных сред, соответствующим оборудованием и инструментами. Для работы необходимы спиртовки или газовые горелки, микробиологические петли, микологические лопаточки, шпатели, эпиляционные и анатомические пинцеты, кусачки маникюрные, скальпели, ножницы, ложечки Фолькмана, пипетки разные, пастеровские пипетки, иглы препаровальные, стеклянные палочки, шприцы, низкоскоростная центрифуга, аппарат для встряхивания, чашки Петри, пробирки, стеклянная посуда, ультрафиолетовая лампа Вуда с фильтром, микроскопы, осветители, термостаты, автоклавы, холодильники, сухожаровые шкафы, бактерицидные лампы.
Воздух в лаборатории (боксе) обеззараживается ультрафиолетовыми облучателями. Их включают на 1 - 1,5 ч и входят в помещение через 20 мин после выключения. Пол и рабочие столы в помещениях, где производится работа с патологическим материалом, ежедневно убирают влажным способом с применением дезинфицирующих средств (5% раствор хлорамина, 5% осветленная хлорная известь). Термостаты еженедельно протирают 0,5% раствором хлорамина, стены обрабатывают дезсредствами 1 раз в месяц. Стерилизацию посуды и инструментов горячим воздухом в сухожаровых шкафах производят при 180 С в течение 60 мин (контроль - виннокаменная кислота).
1.2. Взятие и доставка патологического материала
Необходимо помнить, что любой изучаемый в лаборатории материал потенциально опасен. Взятие патологического материала следует производить в асептических условиях, в халатах и марлевых масках. Одежду больного при взятии материала защищают клеенчатой пелериной и салфеткой. Взятие материала с ног производят на специальной скамейке, покрытой клеенкой. Пелерины, салфетки после каждого использования обеззараживают кипячением в течение 15 мин или погружением в дезраствор (5% раствор хлорамина на 3 ч или 5% осветленную хлорную известь -на 2 ч). Патологический материал или культуры переносят в специальной таре (металлические или пластмассовые ящики с крышками, биксы), которую внутри и снаружи ежедневно обрабатывают дезрастворами.
1.3. Работа с патологическим материалом
Все посевы производятся вблизи огня спиртовки или газовой горелки с обжиганием инструмента и краев пробирки. Засеянные пробирки и другие емкости должны иметь четкие надписи с указанием даты посева, номера анализа или вида и штамма возбудителя.
Загрязненные пипетки, шпатели, предметные и покровные стекла обеззараживают погружением в 5% раствор фенола, 5% раствор лизола на 30 мин или в 5% раствор хлорамина или 5% раствор осветленной хлорной извести на 2-3 ч, затем моют и кипятят. Случайно разбитые емкости, содержащие патологический материал, заливают одним из вышеупомянутых дезрастворов на 2-3 ч с последующей влажной уборкой помещения с применением дезсредств. Патологический материал (кусочки тканей, кожные и ногтевые чешуйки) и отработанные культуры грибов автоклавируют при 2 атм. /132 С/ 20 мин (контроль - мочевина), при 1,5 атм. /126 С/-30 мин (контроль - бензойная кислота), либо кипятят 1 час в воде или 30 мин в 1% мыльно-содовом растворе. Жидкий патологический материал (кровь, мочу, мокроту, промывные воды и т.д.) и фекалии, смешанные в соотношении 1:1 с водой, засыпают хлорамином или хлорной известью 200 г/л на 2 ч с последующей эвакуацией в канализацию.
Особенности получения патологического материала в зависимости от локализации микоза
Грибы способны поражать различные органы человека. Это определяет разнообразие патологического материала, который необходимо исследовать при подозрении на микоз. Обязательным условием успешного исследования является взятие материала из очагов поражения в асептических условиях.
Мокроту - утреннюю порцию, выделенную при откашливании, собирают в стерильную банку со стеклянными бусами, желательно с завинчивающейся крышкой. Перед этим больному необходимо тщательно почистить зубы и три раза прополоскать ротовую полость и зев одним из растворов: 2% питьевая сода, 2% бура, марганцево-кислый калий слегка розового цвета.
Промывную жидкость бронхов, гайморовых полостей, плевральную жидкость, желудочный и дуоденальный сок, желчь, цереброспинальную жидкость собирают в стерильные пробирки.
Мочу собирают после тщательного туалета наружных половых органов в середине или в конце мочеиспускания в количестве 10 - 15 мл в стерильные банки. У женщин моча собирается катетером.
Фекалии (последняя порция) собирают в баночку.
Гной из закрытых полостей (абсцессы) берут с помощью пунктирования и аспирации в стерильные пробирки.
Отделяемое свищей (гнойное и серозное) в случае обильного выделения можно собирать в стерильные пробирки. При незначительном количестве отделяемого материал собирают тампоном, пастеровской пипеткой или бактериологической петлей.
Отделяемое слизистых ротовой полости, миндалин, влагалища, цервикального канала, уретры, носа, конъюнктивы глаз для посева берут тампоном из гигроскопической ваты, который помещают в стерильную пробирку или в пробирку с 2 мл жидкой питательной среды (сусло, Сабуро, МПБ). Материал со слизистых оболочек рта и зева берут вначале с внутренней поверхности щек, неба, губ, затем с языка, тщательно протирая тампоном спинку и корень, а в заключение - круговым движением из зева. Для микроскопии соскобы беловато-сероватых налетов слизистых берут ложечкой Фолькмана, предметным стеклом.
Кровь берут из локтевой вены в количестве 5-10 мл после тщательной дезинфекции кожи в области локтевого сгиба.
Кусочки органов и биопсированную ткань собирают в две стерильные чашки Петри или баночки с завинчивающейся крышкой. Одну пробу заливают 10% раствором формалина (40% формальдегид - 1:10) для гистологического исследования, вторую используют для микологического исследования.
Ногтевые чешуйки соскабливают скальпелем из глубоких слоев пораженной ногтевой пластинки, собирают в стерильную чашку Петри или помещают между двух стерильных предметных стекол, которые фиксируют резинкой и помещают в бумажный пакетик. При паронихиях кожные чешуйки собирают скальпелем с поверхности края околоногтевого валика, а капли гноя берут из-под валика бактериологической петлей или пастеровской пипеткой.
Кожные чешуйки с мест поражения соскабливают скальпелем, берут на исследование покрышки пузырьков и пустул. При поражениях наружного слухового прохода кожные чешуйки берут петлей или тампоном. Тампон помещают в сухую пробирку.
Патологический материал транспортируют в специальной таре или металлических биксах, защищая от прямых солнечных лучей. Поступивший в лабораторию материал исследуют в течение часа после взятия при хранении в условиях комнатной температуры или не более чем через 3 ч при хранении в холодильнике при температуре +4 С. Исключение составляет цереброспинальная жидкость, которую хранят в термостате при +37 С в течение того же времени. Ногтевые и кожные чешуйки при необходимости можно исследовать в более поздние сроки.
В сопроводительном документе указывают фамилию, имя, отчество, пол, возраст и адрес больного, предполагаемый клинический диагноз, наименование исследуемого материала, время его взятия, локализацию очага, номер истории болезни, фамилию врача и учреждение, направляющее материал.